序論：好文章的創(chuàng)作是一個(gè)不斷探索和完善的過程，我們?yōu)槟扑]十篇細(xì)胞增殖論文范例，希望它們能助您一臂之力，提升您的閱讀品質(zhì)，帶來更深刻的閱讀感受。

篇（1）

人乳鐵蛋白(HumanLactoferrin，hLF)是主要存在于人乳清中的球蛋白，乳汁別是初乳中含量最高，具有廣譜抗菌、抗病毒、抗腫瘤等作用。國(guó)外有學(xué)者將其應(yīng)用于腫瘤患者的治療，但是對(duì)其作用機(jī)制的研究較少。目前國(guó)內(nèi)較少有關(guān)于hLF作用于細(xì)胞的報(bào)道，我們選用易早期轉(zhuǎn)移的鼻咽癌(NPC)細(xì)胞作為研究對(duì)象，以中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO)、人肝臟細(xì)胞(L02)作為正常細(xì)胞對(duì)照，觀察hLF在體外是否具有抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，探討hLF抗腫瘤的作用機(jī)制，從而為腫瘤的治療提供研究基礎(chǔ)，為臨床實(shí)驗(yàn)及應(yīng)用提供新的理論依據(jù)。

一、材料與方法

1.1材料人鼻咽癌細(xì)胞(CNE)、中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO)、人肝臟細(xì)胞(L02)均購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞資源中心。重組hLF(Lot:L0520，溶于PBS中，儲(chǔ)存濃度5mg/ml，-20℃儲(chǔ)存?zhèn)溆?和噻唑藍(lán)(MTT，Lot:M2128)均購(gòu)自Sigma公司。RPMI1640、胎牛血清購(gòu)自HyClone公司。其他試劑均為分析純。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)各細(xì)胞系均應(yīng)用含10%胎牛血清和1%青鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基，5%CO2，37℃培養(yǎng)。

1.2.2MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖設(shè)空白對(duì)照組和hLF干預(yù)組。待細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，接種數(shù)為5×104/孔。每組細(xì)胞設(shè)5個(gè)平行孔，各組細(xì)胞分別加入不同濃度的hLF(0，1.25×10-3,2.5×10-3，5×10-3，10×10-3，20×10-3，40×10-3g/L)，每孔均為200μl。作用24h后，加入MTT(5g/L，每孔20μl)，繼續(xù)培養(yǎng)4h，測(cè)定A570nm吸光度。

1.2.3細(xì)胞形態(tài)觀察細(xì)胞經(jīng)hLF處理后，傾去上層懸浮死細(xì)胞并用PBS洗兩遍，加入新鮮培養(yǎng)基。同樣處理對(duì)照孔細(xì)胞，將細(xì)胞置于倒置顯微鏡下，觀察細(xì)胞形態(tài)的變化。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用x±s表示，組間比較用方差分析。

二、結(jié)果

2.1重組hLF對(duì)鼻咽癌細(xì)胞CNE、人肝臟細(xì)胞L02、中國(guó)倉(cāng)鼠細(xì)胞CHO系的增殖能力的影響對(duì)CNE呈現(xiàn)劑量依賴性的抑制作用，而對(duì)正常細(xì)胞無抑制作用。人乳鐵蛋白對(duì)各細(xì)胞體外增殖的影響與空白對(duì)照比較:1)P<0.05

2.2細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察顯微鏡鏡下可見，空白對(duì)照組癌細(xì)胞密集成片生長(zhǎng)，如鋪路卵石狀，細(xì)胞膜圓潤(rùn)，透明，顆粒較少，細(xì)胞間界限清楚，并可隱約見到細(xì)胞核。hLF處理組癌細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯的改變，隨hLF濃度增加，細(xì)胞從正常的增殖旺盛的貼壁生長(zhǎng)，逐漸表現(xiàn)為生長(zhǎng)緩慢，黏附力降低，細(xì)胞變圓，細(xì)胞胞質(zhì)粗糙，細(xì)胞內(nèi)顆粒逐漸增多，且透明度降低，立體感較差，細(xì)胞形態(tài)完整性受損，而正常細(xì)胞在細(xì)胞鏡檢圖hLF作用下無顯著變化。

三、討論

hLF多種生物學(xué)功能通過免疫系統(tǒng)的激活與調(diào)節(jié)得以實(shí)現(xiàn)。Bezaul研究發(fā)現(xiàn)，乳鐵蛋白能抑制鼠實(shí)體瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。腫瘤內(nèi)注射LF，可以明顯的減小實(shí)體瘤的體積，且作用效果與LF干預(yù)天數(shù)相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，乳鐵蛋白的抗頭頸部腫瘤作用是通過抑制腫瘤細(xì)胞增殖實(shí)現(xiàn)的。Wolf等發(fā)現(xiàn)，人乳鐵蛋白通過阻斷頭頸部腫瘤細(xì)胞由G0到G1期的轉(zhuǎn)化來抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。人乳鐵蛋白對(duì)鼠的SCC細(xì)胞系生長(zhǎng)的抑制作用，與劑量成正相關(guān)；而且人乳鐵蛋白抑制頭頸部細(xì)胞癌的作用是通過直接的細(xì)胞毒作用及系統(tǒng)性的免疫調(diào)節(jié)作用實(shí)現(xiàn)的。

Varadhachary等人做了大量的口服臨床試驗(yàn)，證實(shí)乳鐵蛋白無藥物相關(guān)的有害作用。鼻咽癌作為頭頸部腫瘤之一，其惡性程度較高，早期即可出現(xiàn)頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，臨床上有轉(zhuǎn)移至骨盆、肺、肝等多器官的病例。選用鼻咽癌細(xì)胞作為研究對(duì)象，具有一定的代表意義。

本研究結(jié)果顯示，人乳鐵蛋白可以抑制鼻咽癌細(xì)胞增殖，且呈劑量依賴性，對(duì)正常細(xì)胞的增殖無明顯抑制作用。這一結(jié)果，為開發(fā)乳鐵蛋白的抗癌功效提供了理論依據(jù)。

篇（2）

從近幾年的高考來看，命題重點(diǎn)圍繞細(xì)胞周期中染色體行為和數(shù)目變化規(guī)律，減數(shù)分裂與有絲分裂的比較及圖像識(shí)別，減數(shù)分裂的過程及與遺傳的關(guān)系。那么學(xué)生在這塊內(nèi)容中到底還有哪些未落實(shí)到位？又該如何幫助學(xué)生有效解決這些問題？

一、典型錯(cuò)誤分析

【典例】圖為雄果蠅體內(nèi)某細(xì)胞分裂過程中，每條染色體上DNA含量變化(甲曲線)和染色體數(shù)目變化(乙曲線)。請(qǐng)據(jù)圖回答：

(1) CD段細(xì)胞中有( )條染色體，DE段有染色單體( )條，F(xiàn)G段細(xì)胞中有DNA( )個(gè)，DE段可形成四分體( )個(gè)。

(2)在A點(diǎn)若用3H標(biāo)記該細(xì)胞的DNA雙鏈，再將其轉(zhuǎn)入不含3H的培養(yǎng)基中

培養(yǎng)，在FG段一個(gè)細(xì)胞中的染色體總數(shù)和被3H標(biāo)記的染色體數(shù)分別為( ) ( )。

(3)若該細(xì)胞基因型為AaXbY，在分裂完成后產(chǎn)生了一個(gè)AYY的，則另三個(gè)的基因型分別為( )( )( )。

(4)該細(xì)胞某一條染色體的兩條單體相同位點(diǎn)出現(xiàn)不同基因的變化可發(fā)生在( )段。

該題考查目標(biāo)：有絲分裂與減數(shù)分裂的曲線辨析，減數(shù)分裂中染色體、DNA、單體的數(shù)目變化規(guī)律，染色體、DNA、脫氧核苷酸鏈之間的關(guān)系，及減數(shù)分裂與生物變異的聯(lián)系。通過學(xué)案反映出學(xué)生存在以下幾方面的問題：

1.基礎(chǔ)知識(shí)不扎實(shí)，記憶不牢，知識(shí)點(diǎn)混淆。例如：在第(1)小題中學(xué)生由于把果蠅染色體數(shù)4對(duì)記成了4條從而造成CD段錯(cuò)寫為含4條染色體。由于不明確四分體的概

(3)糾錯(cuò)補(bǔ)偏，反思內(nèi)化。有一句教育的真理“世界上最有價(jià)值的習(xí)題不是專家出的習(xí)題，而是自己做錯(cuò)的習(xí)題”。二輪復(fù)習(xí)抓錯(cuò)題相當(dāng)機(jī)的導(dǎo)航燈一樣，它可以幫我們指明前進(jìn)的方向。學(xué)生在一輪復(fù)習(xí)中已做了大量試題，經(jīng)歷了多次模擬考試，難免出現(xiàn)許多錯(cuò)誤，若能指導(dǎo)學(xué)生將這些錯(cuò)誤進(jìn)行分類整理，就會(huì)發(fā)現(xiàn)反復(fù)出錯(cuò)的地方就是自己知識(shí)上的薄弱環(huán)節(jié)，這時(shí)就可針對(duì)性地翻閱書本，結(jié)合書本來解決知識(shí)漏洞，當(dāng)然有些錯(cuò)誤可能是學(xué)生不注意使用生物科學(xué)術(shù)語回答，畫圖表、寫實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)不規(guī)范嚴(yán)謹(jǐn)?shù)仍斐傻?，通過糾錯(cuò)也可有效提醒學(xué)生對(duì)自己這方面問題的關(guān)注。

二輪復(fù)習(xí)不做題不行，但沉迷于題海也不行，關(guān)鍵要提高做題質(zhì)量?？偨Y(jié)歸納常見題型的解題規(guī)律、方法技巧，從而達(dá)到弄懂一道題，旁通一類題的目的。也可通過演練近幾年的高考真題親身感觸高考題的命題思路、設(shè)問方式，從中感悟解題技巧。

3.消除情感夢(mèng)魘，增強(qiáng)自信。 美國(guó)著名心理學(xué)家Robert Rosenthal曾做過這樣一個(gè)實(shí)驗(yàn)：他從某個(gè)班級(jí)的花名冊(cè)中隨意挑選了幾個(gè)名字，并且告訴老師這些學(xué)生經(jīng)過測(cè)試智商較高。之后，老師便關(guān)注并鼓勵(lì)他們，這些學(xué)生也由于有了自信而努力學(xué)習(xí)。八個(gè)月之后，那些“高智商”的學(xué)生的成績(jī)竟有了驚人的進(jìn)步。這個(gè)實(shí)驗(yàn)證實(shí)了自信的重要性。那么如何增強(qiáng)學(xué)生對(duì)考試的自信，以實(shí)現(xiàn)從容應(yīng)考呢？

(1)充分的考前準(zhǔn)備：多數(shù)學(xué)生都有這樣的體會(huì)：“一看到考題不難，緊張不安的情緒便會(huì)隨之減少，腦子不再麻木，思維也變得靈活了?！币虼?，考前一定要做好知識(shí)與技能雙重準(zhǔn)備，并針對(duì)考試中可能出現(xiàn)的復(fù)雜情況，進(jìn)行有目的的訓(xùn)練，做到胸有成竹，考試當(dāng)然也充滿信心。

篇（3）

 

葛根素(Puerarin)是葛根中具有異黃酮結(jié)構(gòu)的主要活性成分之一，有研究表明，葛根素具有預(yù)防骨質(zhì)疏松的作用 [1]。本文觀察了葛根素在成骨-破骨細(xì)胞共育體系中對(duì)大鼠成骨細(xì)胞增殖及堿性磷酸酶活性的影響, 以評(píng)價(jià)其對(duì)骨代謝的作用。

1材料

1.1動(dòng)物普通級(jí)1日齡Sprange-Dawley(SD)新生大鼠和5日齡SD新生大鼠，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：2008B006。

1.2藥物葛根素 廣東省藥品檢驗(yàn)所　批號(hào): 180752-200809。

1.3試劑DMEM培養(yǎng)基（GIBCO公司），0.25%胰蛋白酶(Amersco公司)，Ⅱ型膠原酶（Sigma公司），堿性磷酸酶試劑盒(Sigma公司)。

1.4儀器超凈工作臺(tái)(蘇州凈化設(shè)備廠產(chǎn)品)，倒置相差顯微鏡(Nikon產(chǎn)品)，CO2培養(yǎng)箱(ThermoForma公司產(chǎn)品)，細(xì)胞培養(yǎng)板(Costar公司產(chǎn)品)， 0.45μm過濾膜(Costar公司產(chǎn)品)，紫外分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限公司）。論文格式。

2方法

2.1分離培養(yǎng)OB 參照文獻(xiàn)[2]。

2.2分離培養(yǎng)OC 參照文獻(xiàn)[2]。

2.3共育體系的建立

在已制作好并消毒的24孔共育培養(yǎng)板，以3×104個(gè)/孔的密度將OB接種到OB培養(yǎng)室內(nèi)，以3×104個(gè)/孔的密度將OC接種到OC培養(yǎng)室內(nèi)，每20min觀察一次OC貼壁情況，同時(shí)觀察是否有細(xì)胞透過半透膜進(jìn)入OC培養(yǎng)室。

2.4MTT法測(cè)定葛根素對(duì)OB增殖的影響

取第三代OB以3×104個(gè)/孔的密度接種于OB 培養(yǎng)室，3h后，將新分離的OC以3×104個(gè)/孔接種于OC培養(yǎng)室；24h后換入無血清培養(yǎng)液，待細(xì)胞周期同步化后，更換為不同濃度的葛根素培養(yǎng)液。各劑量組的終濃度分別為0.05ug/ml、0.5ug/ml、5ug/ml、10ug/ml、50ug/ml、100ug/ml。每個(gè)濃度設(shè)6個(gè)復(fù)孔。分別培養(yǎng)7天，更換無血清的DMEM培養(yǎng)基400ul，同時(shí)加入5mg/mL的MTT80ul/孔，置37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育4h后，在酶標(biāo)儀上測(cè)OD值，波長(zhǎng)為570nm。參比波長(zhǎng)為630nm。論文格式。

2.5PNPP法檢測(cè)葛根素對(duì)OB ALP活性的影響

取第三代OB以5×104個(gè)/孔的密度接種于OB培養(yǎng)室，3h后，將新分離的OC以5×104個(gè)/孔接種于OC培養(yǎng)室；待細(xì)胞周期同步化后，再分別加入0.5μg/ml、5μg/ml、50μg/ml的葛根素，與空白組對(duì)照。培養(yǎng)7d后，加入500ul 0.1%TritonX-100作用30min, 收集細(xì)胞裂解液，采用ALP試劑盒檢測(cè)其活性。

3結(jié)果

3.1葛根素對(duì)成骨細(xì)胞增殖的影響

在共育體系中，成骨細(xì)胞在5～100μg/ml的葛根素中培養(yǎng)7d后產(chǎn)生促明顯的增殖作用。其中以100μg/ml促增殖作用最強(qiáng)。而0.05μg/ml、0.5μg/ml的葛根素作用無明顯差異。見表1。

篇（4）

   

蒼術(shù)（Rhizoma atratylodes）為菊科植物南蒼術(shù)Atractylodes lancea ( Thunb.) DC.或北蒼術(shù)Atractylodes chinensis Koidz.等的干燥根莖。蒼術(shù)性辛、苦、溫，歸脾、胃、肝經(jīng)，具有燥濕健脾、祛風(fēng)散寒、明目作用。主治脘腹脹滿、泄瀉、水腫、風(fēng)濕痹痛、風(fēng)寒、感冒等［1］。

    

蒼術(shù)在中醫(yī)臨床中使用十分廣泛。已有研究發(fā)現(xiàn)蒼術(shù)揮發(fā)油增加去卵巢雌性大鼠的骨鈣含量（閆雪生《蒼術(shù)油軟膠囊的研制》。山東中醫(yī)藥大學(xué)碩士學(xué)位論文，2002），但對(duì)蒼術(shù)揮發(fā)油是否影響成骨細(xì)胞的增殖，尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)研究蒼術(shù)揮發(fā)油對(duì)成骨細(xì)胞UMR-106的增殖作用。

1  材料與方法

1.1  材料

蒼術(shù)藥材購(gòu)自上海德康藥業(yè)有限公司,經(jīng)中國(guó)第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院生藥教研室黃寶康副教授鑒定為蒼術(shù)Atractylodes lancea (Thunb.) DC.的干燥根莖。

1.2  試劑

DMEM 培養(yǎng)基(Cibco)；3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基-四唑氫溴酸鹽MTT(Sigma)；胎牛血清FBS(杭州四季青生物工程材料研究所)；胰蛋白酶(Cibco)；其它試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.3  方法

1.3.1  揮發(fā)油樣品的制備水蒸氣蒸餾法：將藥材樣品粉碎過40目篩，精確稱取200 g的蒼術(shù)，加水浸泡1 h，然后用揮發(fā)油提取器按常規(guī)水蒸氣蒸餾，提取直至揮發(fā)油的量不再增加，蒸餾液用正己烷萃取，萃取液用無水硫酸鈉干燥，過濾，微熱蒸去溶劑得揮發(fā)油樣品，揮發(fā)油樣品為淡黃色透明油狀物，具有刺激性氣味。取50 mg揮發(fā)油樣品溶于1 ml二甲基亞砜中，用滅菌過的0.2 mm 濾器( Gelmann Sciences) 除菌,并于4℃保存，備用。臨用時(shí)用DMEM培養(yǎng)液稀釋至所需濃度。

1.3.2  成骨樣細(xì)胞UMR－106的培養(yǎng)［3］UMR－106 (大鼠成骨肉瘤細(xì)胞系) 細(xì)胞株獲贈(zèng)于江蘇鎮(zhèn)江醫(yī)學(xué)院病原生物教研室,源于美國(guó)麻省醫(yī)學(xué)院。將UMR-106細(xì)胞培養(yǎng)于10％胎牛血清（100KU/L青霉素，100 mg/ml鏈霉素）的無菌DMEM培養(yǎng)基中，置37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞，用0.25％胰蛋白酶消化，加含胎牛血清的培養(yǎng)基制成細(xì)胞懸浮液，調(diào)整細(xì)胞濃度為5×106個(gè)/ml接種于100 ml培養(yǎng)瓶中，二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育，2～3 d換液1次。

1.3.3  MTT 法測(cè)定細(xì)胞的增殖［2］取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞消化計(jì)數(shù)后,用含血清的DMEM 細(xì)胞培養(yǎng)液將細(xì)胞濃度稀釋至1×105個(gè)/ml ,鋪入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中(100 μl/孔)培養(yǎng)24 h后加入含不同濃度揮發(fā)油(每個(gè)濃度6孔)的無血清DMEM培養(yǎng)。結(jié)束培養(yǎng)4 h前棄去培養(yǎng)液,每孔加入20 μl MTT(5 mg/ml,用PBS配制)繼續(xù)孵育4 h,有藍(lán)紫色沉淀生成,每孔加入150 μl二甲基亞砜(DMSO) ,振蕩10 min待沉淀完全溶解,用酶標(biāo)儀以550 nm 為測(cè)定波長(zhǎng)、650 nm為參比波長(zhǎng)測(cè)定吸光值,以不加中藥的細(xì)胞孔測(cè)得的吸光值為空白,用t檢驗(yàn)進(jìn)行各加藥組與空白組之間均值的比較。細(xì)胞增殖率的計(jì)算如下：

    

增殖率（%）= Ai實(shí)驗(yàn)組- Ao對(duì)照組Ao對(duì)照組×100%

    

Ai：不同條件下的吸光值；Ao：空白組的吸光值

2  結(jié)果

2.1  MTT 法測(cè)定細(xì)胞增殖與吸光度的關(guān)系將UMR-106細(xì)胞分別以6個(gè)不同濃度(1×105～1.2×106個(gè))鋪入96 孔板,培養(yǎng)8 h貼壁后,用上述方法測(cè)定每孔吸光度(Y),與細(xì)胞數(shù)目(X)作線性回歸,得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：Y=0.054+0.092 6×10-6X(r=0.986 0,n=6),兩者具有良好的線性關(guān)系。見圖1。

2.2  揮發(fā)油對(duì)細(xì)胞增殖的作用用1，0.1，0.01，0.001 mg/ml 4種濃度的揮發(fā)油作用于細(xì)胞24 h，在λ＝550 nm測(cè)定其吸光值。結(jié)果見表1 。表1  不同揮發(fā)油濃度對(duì)UMR-106的增殖作用(略)

蒼術(shù)揮發(fā)油濃度0.001 mg/ml時(shí)培養(yǎng)24 h，可明顯促進(jìn)細(xì)胞的增殖,細(xì)胞的增殖率為10.44%。在低的濃度下對(duì)細(xì)胞增殖有輕微的抑制作用,表明揮發(fā)油短期內(nèi)使用低濃度較好。

    

為了觀察揮發(fā)油促細(xì)胞增殖的最適宜的作用時(shí)間,用濃度為0.001 mg/ml的蒼術(shù)揮發(fā)油作用于細(xì)胞分別為24，48，72 h , 在λ＝550 nm測(cè)定其吸光值。結(jié)果見表2。表2  不同作用時(shí)間對(duì)細(xì)胞增殖的影響(略)

由表2可見，當(dāng)揮發(fā)油在濃度為0.001 mg/ml作用24 h時(shí)能明顯刺激UMR-106增殖，在近48 h時(shí)增殖率為20.96％， 達(dá)到最強(qiáng),72 h 時(shí)細(xì)胞數(shù)目又下降。

3  討論

    

蒼術(shù)揮發(fā)油在0.001 mg/ml濃度下作用24，48 h，均對(duì)UMR-106增殖有明顯的促進(jìn)作用。UMR-106大鼠成骨肉瘤細(xì)胞系從形態(tài)和性質(zhì)上都保留了成骨細(xì)胞獨(dú)有的特征, 并且具有穩(wěn)定、均一、純度高等優(yōu)點(diǎn)。 因此,UMR-106 細(xì)胞作為一種國(guó)際公認(rèn)的成骨細(xì)胞系可以用來代替成骨細(xì)胞［3］。在骨形成最初階段的成骨細(xì)胞增殖期, 成骨細(xì)胞數(shù)量增多, 形成多層細(xì)胞并合成、分泌I型膠原以便最終礦化形成骨結(jié)節(jié)。成骨樣細(xì)胞的增殖與細(xì)胞培養(yǎng)液中藥物的成分有關(guān), 與成骨樣細(xì)胞UMR-106共同體外培養(yǎng)的方法可能作為對(duì)骨形成有促進(jìn)作用的活性化合物的篩選模型, 經(jīng)過進(jìn)一步的動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)從這些活性藥物中追蹤對(duì)骨形成有促進(jìn)作用的活性成分。因此，以成骨樣細(xì)胞UMR-106 的增殖為活性指標(biāo),觀察了蒼術(shù)揮發(fā)油對(duì)該細(xì)胞系增殖的作用。由于采用的是蒼術(shù)揮發(fā)油和細(xì)胞共同體外培養(yǎng)的方法,推測(cè)蒼術(shù)揮發(fā)油中含有直接刺激成骨樣細(xì)胞增殖的成分,為蒼術(shù)治療骨質(zhì)疏松癥提供初步篩選，具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

篇（5）

【Key words】 Rapamycin; Liver transplantation; Cold preservation; Reperfusion; Biliary epithelial cells; Proliferation

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器

兔抗增殖細(xì)胞核抗原多克隆抗體、鼠抗pSTAT3tyr705單克隆抗體均購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司；ChemMateTM Envision免疫組化試劑盒為丹麥Dako公司產(chǎn)品；RPM為美國(guó)惠氏百宮制藥公司惠贈(zèng)。

1.3 各組術(shù)后生存分析

1.4 肝功能指標(biāo)檢測(cè)

1.5 兔抗增殖細(xì)胞核抗原、α平滑肌肌動(dòng)蛋白免疫組織化學(xué)檢測(cè)

肝組織常規(guī)固定、包埋、切片。采用兔抗增殖細(xì)胞核抗原作為細(xì)胞增殖期G1S期的評(píng)價(jià)指標(biāo)，α平滑肌肌動(dòng)蛋白作為肌纖維母細(xì)胞標(biāo)志。按ChemMateTM Envision免疫組化試劑盒說明書操作。顯微鏡下觀察α平滑肌肌動(dòng)蛋白表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞的胞質(zhì)呈棕色，增殖細(xì)胞的胞核呈棕色。計(jì)算7個(gè)高倍鏡(×400)視野內(nèi)，每100個(gè)膽管細(xì)胞中增殖的膽管上皮細(xì)胞所占比例的均值作為該樣本的膽管上皮細(xì)胞增殖率［4］。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

計(jì)量資料以±s表示，所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 10.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，多組均數(shù)間的比較采用單因素方差分析，采用KaplanMeier法繪制生存曲線，Logrank法檢驗(yàn)各組生存率之間的差異。

2 結(jié)果

2.1 各組術(shù)后生存分析

冷保存12 h組生存率明顯低于冷保存1 h組(P=0.017 4)，而與雷帕霉素組水平接近(P=0.89，圖1)。兩組大鼠死亡的主要原因?yàn)橐浦哺胃喂δ懿蝗?，表現(xiàn)為肝臟淤血或伴有局灶性壞死，腹水、黃疸，肝功能酶譜升高，部分死亡大鼠膽管內(nèi)可見褐色膽泥形成。

圖1 各組肝移植術(shù)后生存曲線

2.2 各組肝功能檢測(cè)

2.3 各組膽管上皮細(xì)胞增殖

2.4 膽管周圍肌纖維母細(xì)胞分布

圖2 肝移植術(shù)后膽管上皮細(xì)胞增殖(紅色箭頭所示為增殖細(xì)胞) (2氨基聯(lián)苯胺染色 ×400)

圖3 肝移植術(shù)后肌纖維母細(xì)胞分布(紅色箭頭所示為肌纖維母細(xì)胞) (2氨基聯(lián)苯胺染色 ×400)

3 討論

殘存的膽管上皮細(xì)胞在對(duì)損傷做出再生修復(fù)時(shí)，雖然最終能恢復(fù)到近似原先的細(xì)胞形態(tài)，但在該過程中極有可能經(jīng)歷DNA損傷或基因序列改變，具有和正常細(xì)胞不同的功能，分泌多種與器官纖維化密切相關(guān)的細(xì)胞因子如TGFβ等，促進(jìn)膽管周圍成纖維細(xì)胞活化轉(zhuǎn)化為肌纖維母細(xì)胞，而后者的持續(xù)出現(xiàn)是器官纖維化過程的關(guān)鍵［6］。同時(shí)，大量而活躍的細(xì)胞分裂需要消耗較多的能量，就有可能削弱肝內(nèi)非新生細(xì)胞正常的能量代謝過程［7］。這對(duì)移植物的長(zhǎng)期存活及功能是不利的。我們觀察到伴隨著明顯的膽管上皮細(xì)胞增殖，較多肌纖維母細(xì)胞環(huán)繞于冷保存12 h組膽管周圍。這表明嚴(yán)重冷保存再灌注誘導(dǎo)的膽管上皮細(xì)胞增殖可能是促進(jìn)肌纖維母細(xì)胞聚集的重要因素。由于膽管上皮細(xì)胞和膽管周圍肌纖維母細(xì)胞之間維持著非常精妙的平衡，冷保存再灌注對(duì)膽管上皮細(xì)胞的嚴(yán)重?fù)p傷觸發(fā)肌纖維母細(xì)胞的大量活化，導(dǎo)致膽管壁創(chuàng)面收縮，增加了膽管壁及其周圍組織纖維化和膽管狹窄形成的風(fēng)險(xiǎn)，在肝外膽管或肝內(nèi)大膽管常表現(xiàn)為管腔狹窄，在小膽管則可能出現(xiàn)管腔阻塞［8］。我們還觀察到大膽管尤其肝門附近大膽管內(nèi)壁的膽管上皮細(xì)胞增殖最為活躍，該區(qū)結(jié)締組織豐富，內(nèi)含大量成纖維細(xì)胞，極易受到膽管上皮細(xì)胞增殖的影響而活化為肌纖維母細(xì)胞。這也許正是臨床觀察到的肝門附近大膽管成為移植肝膽道狹窄易患部位的原因之1，也是影響移植物功能與存活的重要因素。

作為1種新型免疫抑制劑，體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)均證實(shí)雷帕霉素抑制膽管上皮細(xì)胞增殖，其有效抑制濃度遠(yuǎn)低于臨床肝移植術(shù)后患者應(yīng)用雷帕霉素作為免疫抑制劑時(shí)的血藥濃度［9］。我們的研究也發(fā)現(xiàn)，雷帕霉素明顯抑制由冷保存再灌注損傷誘導(dǎo)的膽管上皮細(xì)胞增殖，并減少膽管周圍肌纖維母細(xì)胞的聚集。雷帕霉素是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子3活化的特異性抑制劑，因而部分阻斷轉(zhuǎn)錄激活因子3介導(dǎo)的信號(hào)通路，從而調(diào)控細(xì)胞周期進(jìn)展，影響細(xì)胞增殖與分化［10］，這可能是其抑制膽管上皮細(xì)胞增殖的分子機(jī)制之1。同時(shí)我們還觀察到，雷帕霉素雖然明顯抑制肝移植術(shù)后膽管上皮細(xì)胞的增殖，但并未降低術(shù)后14 d內(nèi)生存率，進(jìn)1步提示以膽管上皮細(xì)胞增殖為靶點(diǎn)的雷帕霉素極可能成為臨床防治移植肝膽管周圍纖維化、膽管狹窄等并發(fā)癥的有力武器，將會(huì)更廣泛地應(yīng)用于肝移植領(lǐng)域。

【參考文獻(xiàn)】

篇（6）

摘要：骨骼肌損傷是一種常見的運(yùn)動(dòng)創(chuàng)傷，但是骨骼肌自然愈合時(shí)間一般較長(zhǎng)，而且這種修復(fù)一般是不完全的；如何加快其愈合

過程成為運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中迫切需要解決的問題。肌衛(wèi)星細(xì)胞（muscle satellite cells）于1961 年被 Mauro 等首次在蛙骨骼肌中發(fā)現(xiàn)，這種

具有增殖和自我更新能力的成肌前體細(xì)胞被認(rèn)為是骨骼肌修復(fù)中不可或缺的細(xì)胞。在骨骼肌損傷后，骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞會(huì)被激活，然后

衛(wèi)星細(xì)胞進(jìn)行增殖、分化、并與損傷部位的骨骼肌纖維融合，從而修復(fù)受損的骨骼肌。

關(guān)鍵詞：肌衛(wèi)星細(xì)胞；激活；增殖；遷移；綜述文獻(xiàn)

方法：利用計(jì)算機(jī)檢索PubMed數(shù)據(jù)庫(kù)20年之內(nèi)的相關(guān)文獻(xiàn)，

檢索詞為“skeletal muscle satellite cells”或“skeletal muscle

regeneration”，納入標(biāo)注：具有原創(chuàng)性的研究性論文，目的方法

具有代表性。排除標(biāo)準(zhǔn)：重復(fù)性研究以及代表性不強(qiáng)的文獻(xiàn)。

1.前言

對(duì)于骨骼肌損傷的機(jī)制并沒有一致認(rèn)同的結(jié)論，目前一般認(rèn)

為骨骼肌損傷后修復(fù)包括三個(gè)時(shí)期：壞死組織的清除、修復(fù)期和

塑形期。在骨骼肌損傷后的修復(fù)期中，衛(wèi)星細(xì)胞是關(guān)鍵性的細(xì)胞。

在生長(zhǎng)因子和受損肌纖維釋放的信號(hào)作用下，位于損傷部位周

圍、處于靜息狀態(tài)下的衛(wèi)星細(xì)胞被激活，然后遷移至骨骼肌損傷

部位，通過增殖、分化，形成新的肌管并與肌纖維融合，從而完

成骨骼肌的修復(fù)。因此弄清衛(wèi)星細(xì)胞的激活、遷移、增殖和分化

等一系列細(xì)胞行為，才能夠?yàn)楣趋兰p傷后積極的治療和合理的

康復(fù)提供幫助和借鑒。

2.文獻(xiàn)綜述提煉

2.1 衛(wèi)星細(xì)胞的激活

早期的研究認(rèn)為骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的激活可能與一系列自分

泌/旁分泌因子有關(guān)，如 IGF-I，F(xiàn)GF 和 HGF 等。也有研究表明，

NO 和 Notch 信號(hào)在骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的激活過程中起著重要的作

用。當(dāng)骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞處于靜息狀態(tài)下時(shí)，骨骼肌中的 NOS（一

氧化碳合成酶）可以合成 NO，而 NOS 在運(yùn)動(dòng)、機(jī)械刺激或者肌

肉損傷后會(huì)進(jìn)行上調(diào)，增加 NO 的釋放，從而激活骨骼肌衛(wèi)星細(xì)

胞。骨骼肌組織在 NO 作用下，能夠引起雌激素抑制劑（Follistatin）

的表達(dá)，它可以抑制肌肉生長(zhǎng)抑制素（Myostatin）的表達(dá)，而

Myostatin是一種骨骼肌形成的負(fù)向調(diào)節(jié)因子。Wozniak和Anderson

等發(fā)現(xiàn)在敲除 NOS 的 mdx 鼠體內(nèi)，衛(wèi)星細(xì)胞激活的比例會(huì)明顯

上升，揭示骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的靜息狀態(tài)可能依靠 NO 維持的。在

骨骼肌損傷后，Notch 的配體（Delta）表達(dá)上調(diào)，從而激活骨骼

肌衛(wèi)星細(xì)胞。Notch 配體與其 Notch-1 受體在靜息的骨骼肌衛(wèi)星細(xì)

胞處相結(jié)合，激活肌肉轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子。在骨骼肌損傷、衛(wèi)星細(xì)胞

激活后，對(duì)抗 Notch-1 作用的 Numb 蛋白表達(dá)將下降。在體和離

體實(shí)驗(yàn)研究證明，Notch 信號(hào)在維持骨骼肌的形態(tài)方面起著重要

作用，調(diào)節(jié)著骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的細(xì)胞周期。

NO 和 Notch 信號(hào)在骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的激活過程中都有著重

要的作用，然而，在骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的激活過程中它們確切的引

發(fā)機(jī)制是什么?它們是如何進(jìn)行平衡調(diào)節(jié)的?這些目前還沒有統(tǒng)一

的定論。

2.2 衛(wèi)星細(xì)胞的遷移

目前對(duì)于衛(wèi)星細(xì)胞的遷移相關(guān)文獻(xiàn)的報(bào)道較少，不過 IGF-1

和 MGF 等生長(zhǎng)因子可以促進(jìn)衛(wèi)星細(xì)胞的遷移，但是其機(jī)制還需

要進(jìn)一步研究。在對(duì)成骨細(xì)胞遷移的研究中發(fā)現(xiàn)：JNK 信號(hào)傳導(dǎo)

通路和 P38、ERK 激酶可以促進(jìn)成骨細(xì)胞的遷移，抑制 Akt 蛋白

的磷酸化，會(huì)削弱成骨細(xì)胞的遷移效果；敲除 PTEN 基因，發(fā)現(xiàn)

成骨細(xì)胞的遷移效果顯著提高，而 PTEN 基因抑制 PI3K 信號(hào)傳

導(dǎo)通路。那么影響衛(wèi)星細(xì)胞遷移的信號(hào)通路是否跟成骨細(xì)胞的信

號(hào)通路有相似之處呢？因此，對(duì)于影響衛(wèi)星細(xì)胞遷移的信號(hào)傳導(dǎo)

通路還需要進(jìn)一步的研究才能得到證實(shí)。

2.3 衛(wèi)星細(xì)胞的增殖分化

在肌衛(wèi)星細(xì)胞發(fā)育過程中，可以觀察到Myf5和MyoD的表達(dá)，

并且在 Myogenin 和 MRF4 的作用下發(fā)生終末分化，形成肌管，最

后發(fā)育為成熟的骨骼肌。肌衛(wèi)星細(xì)胞在靜息狀態(tài)下，可以觀察到

Pax7 的表達(dá)；同時(shí)在受到電刺激后出現(xiàn)的 Pax7 的表達(dá)顯示衛(wèi)星

細(xì)胞重新回到靜息狀態(tài)下。這些研究結(jié)果都表明 MRFs 和 Pax7

調(diào)控著骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的分化。

在一定程度上各種生長(zhǎng)因子也對(duì)衛(wèi)星細(xì)胞的增殖和分化進(jìn)

行著調(diào)控。IGF-I 能夠促進(jìn)骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖和分化，同時(shí)，

還影響 MRFs 的功能；FGF 能夠促進(jìn)骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖，且

在達(dá)到最佳狀態(tài)后增殖能力保持不變；HGF 促進(jìn)骨細(xì)胞增殖，但

是抑制肌衛(wèi)星細(xì)胞的分化；血小板源性生長(zhǎng)因子（PDGF），能

促進(jìn)骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的分化；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β （transforming

growth factor beta，TGF-β）可能抑制骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖和分

化。

3.結(jié)論

3.1 NO 和 Notch 信號(hào)在骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的激活過程中有重要

的作用。

3.2 IGF-I 等生長(zhǎng)因子會(huì)影響衛(wèi)星細(xì)胞的遷移，但是具體機(jī)制

還未研究清楚。

3.3 骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞在修復(fù)受損骨骼肌的過程中主要受到

Pax 和生肌調(diào)節(jié)因子的影響，各種生長(zhǎng)因子也在一定程度上影響

著衛(wèi)星細(xì)胞的增殖和分化。

參考文獻(xiàn)：

[1]Relaix，F(xiàn).and P.S.Zammit，Satellite cells are essential for

skeletal muscle regeneration：the cell on the edge returns centre

stage.Development，2012.139（16）：p.2845-2856.

[2]王瓊.IGF-Ⅰ 與 MGF 對(duì)骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖及遷移的

影響，上海體育學(xué)院，2011.

篇（7）

1 材料和方法

1.1 材料

4～8周齡SD大鼠（軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中心提供），L-DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清（Gibco公司，美國(guó)），胰蛋白酶（Amresco 公司，美國(guó)），格列美脲標(biāo)準(zhǔn)品、甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl te-trazolium，MTT）（Sigma公司，美國(guó)），兔抗大鼠GLUT-1抗體（sc7903）（Santa Cruz公司，美國(guó)），兔抗大鼠GLUT-3抗體（ab41525）（Abcam公司，美國(guó)），氟-18標(biāo)記的脫氧葡萄糖（18F-deoxyglucose，18F-FDG）（中國(guó)總醫(yī)院PET中心）。

1.2 方法

1.2.1 大鼠下頜骨成骨細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定 取4～6周齡的成年SD大鼠，頸拉斷處死后，在75%乙醇中浸泡5 min，無菌取出帶有肌肉和筋膜的下頜骨，置于75%乙醇中洗5～10 s后，在5.25%NaClO中浸泡1 min，用PBS沖洗3次，完全剝離肌肉和筋膜，拔除牙齒，將下頜骨用咬骨鉗剪碎成2 mm×2 mm的骨片后，PBS緩沖液反復(fù)沖洗至骨碎塊呈白色，將其置入小培養(yǎng)瓶中，再加0.25%胰蛋白酶和0.1%Ⅰ型膠原酶的混合液[專業(yè)提供寫作論文和論文寫作服務(wù)，歡迎您的光臨dylw.net]（1∶1），在水浴振蕩器中37 ℃、140 r·min-1消化8 min。消化6次后終止，收集第2～5次消化液，經(jīng)200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾并離心，去除上清后用含20%胎牛血清的L-DMEM重懸細(xì)胞，接種于培養(yǎng)瓶中在37 ℃、5%CO2、飽和濕度條件下于恒溫孵箱中靜置培養(yǎng)40 min，差速貼壁，純化成骨細(xì)胞。經(jīng)酶消化后的組織塊，再次剪碎至1 mm×1 mm，鋪于培養(yǎng)瓶中倒置培養(yǎng)，4 h后翻瓶，待細(xì)胞長(zhǎng)滿傳代。取狀態(tài)良好的第3代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。采用ALP染色、細(xì)胞礦化結(jié)節(jié)染色、細(xì)胞Ⅰ型膠原（collagenⅠ，Col Ⅰ）免疫組化染色和骨鈣素（osteocalcin，OCN）免疫熒光染色法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行成骨細(xì)胞鑒定。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)分組 將成骨細(xì)胞以每毫升1×105個(gè)接種于35 mm平皿中（n=6），每孔加液量為2 mL，細(xì)胞生長(zhǎng)至融合后，無血清培養(yǎng)基孵育24 h，分別予以5.5、16.5 mmol·L-1葡萄糖處理細(xì)胞，持續(xù)24 h，加入10 ?mol·L-1 格列美脲干預(yù)120 min，然后進(jìn)行葡萄糖攝取實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分組：5.5 mmol·L-1組（生理濃度葡萄糖，對(duì)照組）、5.5 mmol·L-1+格列美脲組、16.5 mmol·L-1組（高濃度葡萄糖）、16.5 mmol·L-1+格列美脲組。

1.2.3 葡萄糖攝取的測(cè)定 培養(yǎng)結(jié)束后，棄去培養(yǎng)基，用溫PBS清洗3遍，每孔加入1 mL含7.5 μCi·mL-1 18F-FDG的PBS，37 ℃孵育30 min，用預(yù)冷的PBS沖洗6遍，加入1 mL PBS刮取細(xì)胞，收集細(xì)胞懸液，用共形γ計(jì)數(shù)器測(cè)定總放射性計(jì)數(shù)。用總放射性計(jì)數(shù)與蛋白質(zhì)濃度的比值，反應(yīng)細(xì)胞葡萄糖攝取能力。

1.2.4 GLUT-1和GLUT-3免疫細(xì)胞化學(xué)染色 將第4代成骨細(xì)胞接種在蓋玻片上，培養(yǎng)7 d后用95%乙醇固定，PBS洗滌，加兔抗大鼠GLUT-1、3（1︰100），保濕，4 ℃過夜；PBS洗滌，加生物素化羊抗兔二抗，PBS洗滌；DAB顯色，蘇木素復(fù)染，封片。

1.2.5 Western blot檢測(cè)GLUT-1、3的表達(dá) 將成骨細(xì)胞以每毫升1×105個(gè)接種于25 cm2培養(yǎng)瓶中，細(xì)胞生長(zhǎng)至融合后，無血清培養(yǎng)基孵育24 h，分別予以5.5、16.5 mmol·L-1葡萄糖處理細(xì)胞，持續(xù)24 h，然后加入10 ?mol·L-1格列美脲干預(yù)120 min，實(shí)驗(yàn)分組同葡萄糖攝取測(cè)定實(shí)驗(yàn)，Western blot實(shí)驗(yàn)用12%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sul-fate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）凝膠，300 mA恒流電轉(zhuǎn)移80 min，加兔抗大鼠GLUT-1（1︰2 000稀釋）、GLUT-3 抗體（1︰1 000稀釋）37 ℃孵育4 h，洗膜后，經(jīng)辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG（1︰4 000稀釋）孵育50 min，化學(xué)發(fā)光法顯示抗原抗體復(fù)合物，X線片顯影并定影，采用Labworks4.5成像分析儀系統(tǒng)測(cè)定所有雜交信號(hào)條帶密度，用蛋白目的條帶水平與β-actin的比值表示。以上實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次。

1.3 統(tǒng)計(jì)[專業(yè)提供寫作論文和論文寫作服務(wù)，歡迎您的光臨dylw.net]學(xué)處理

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，對(duì)各組結(jié)果進(jìn)行方差分析和t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 原代細(xì)胞及傳代細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察

在倒置顯微鏡下，組織塊上酶消化下的細(xì)胞經(jīng)差速貼壁后，24 h培養(yǎng)可貼壁，細(xì)胞呈三角形、紡錘形和多角形等多種形態(tài)（圖1A）。連續(xù)組織塊法分離成骨細(xì)胞培養(yǎng)第5天可見成骨細(xì)胞自骨碎片移出，向周圍呈無序生長(zhǎng)（圖1B），傳代細(xì)胞在4 h內(nèi)貼壁，展開的細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形、鱗片形、多邊形，細(xì)胞核呈圓形或橢圓形，輪廓清晰，可見1～3個(gè)核仁。細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底時(shí)，多呈梭形或立方形，排列緊密，生長(zhǎng)突相互連接（圖1C）。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，成骨細(xì)胞可呈重疊生長(zhǎng)。

2.2 成骨細(xì)胞的鑒定

光鏡下，ALP 染色可見細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有紅棕色顆粒或塊狀顆粒（圖2A）；ColⅠ表達(dá)均呈陽(yáng)性，蛋白染色主要位于細(xì)胞質(zhì)，表達(dá)量豐富（圖2B）；長(zhǎng)期培養(yǎng)，細(xì)胞復(fù)層生長(zhǎng)逐漸形成小結(jié)，隨著膠原 堆積和鈣鹽沉積，最后形成不透光的礦化結(jié)節(jié)，經(jīng)茜素紅染色呈紅色塊狀沉淀（圖2C）；OCN免疫熒光染色結(jié)果顯示，細(xì)胞呈陽(yáng)性反應(yīng)，細(xì)胞質(zhì)OCN染成綠色（圖2D）。

2.3 格列美脲對(duì)成骨細(xì)胞葡萄糖攝取的影響

在5.5、16.5 mmol·L-1葡萄糖作用下，成骨細(xì)胞的葡萄糖攝取量分別為1.00±0.06、0.88±0.04。與

5.5 mmol·L-1葡萄糖相比，16.5 mmol·L-1葡萄糖濃度下成骨細(xì)胞的糖攝取能力降低了11.67%（P<0.05）。加入格列美脲后，在5.5、16.5 mmol·L-1葡萄糖作用下，成骨細(xì)胞的葡萄糖攝取量分別為1.35±0.05、1.10±0.06。格列美脲能夠明顯提高5.5、16.5 mmol·L-1葡萄糖濃度下成骨細(xì)胞的糖攝取能力，分別提高了34.68%和25.17%（P<0.05）。

2.4 GLUT-1和GLUT-3的免疫化學(xué)染色

免疫化學(xué)染色結(jié)果顯示GLUT-1、3在不同濃度葡萄糖培養(yǎng)下的成骨細(xì)胞中表達(dá)均呈陽(yáng)性，蛋白主要位于細(xì)胞質(zhì)，表達(dá)量豐富（圖3、4）。

2.5 格列美脲對(duì)成骨細(xì)胞GLUT-1和GLUT-3的影響

與5.5 mmol·L-1葡萄糖相比，16.5 mmol·L-1葡萄糖增加了成骨細(xì)胞GLUT-1蛋白的表達(dá)（P<0.05）。格列美脲能明顯提高5.5和16.5 mmol·L-1葡萄糖濃度下GLUT-1蛋白的表達(dá)（P<0.05）（圖5）。

3 討論

在要求種植牙的患者中，糖尿病患者占有一定的比例。隨著糖尿病的發(fā)病率逐漸增加，這部分患者的比例也在增加。在糖尿病患者中，異常的高糖狀態(tài)可以引起骨量減少或者骨質(zhì)疏松，是種植牙失敗的一個(gè)重要原因[專業(yè)提供寫作論文和論文寫作服務(wù)，歡迎您的光臨dylw.net][11]。在這一病理過程中，成骨細(xì)胞扮演重要的角色。高糖環(huán)境除了影響細(xì)胞的增殖分化，也影響葡萄糖攝取過程。對(duì)于胰島細(xì)胞[1]、血管平滑肌細(xì)胞[2]、絨毛膜細(xì)胞[3]、腎小管細(xì)胞[4]，高糖環(huán)境均可降低了細(xì)胞的糖攝取能力。筆者觀察了120 min時(shí)成骨細(xì)胞糖攝取的變化，發(fā)現(xiàn)高糖環(huán)境下成骨細(xì)胞的糖攝取要顯著低于低糖環(huán)境。

葡萄糖是維持細(xì)胞能量代謝和生命活動(dòng)的重要原料，葡萄糖是一種極性分子，不能以自由擴(kuò)散的方式通過細(xì)胞膜脂雙層結(jié)構(gòu)的疏水區(qū)，除了小腸和腎小管可以通過主動(dòng)運(yùn)輸方式吸收葡萄糖外，其他組織的細(xì)胞都必須通過細(xì)胞膜上的GLUT來攝入葡萄糖。GLUT是一類鑲嵌在細(xì)胞膜上轉(zhuǎn)運(yùn)的載體蛋白質(zhì)，它廣泛分布于體內(nèi)各組織。根據(jù)轉(zhuǎn)運(yùn)葡萄糖的方式分為兩類，一類是鈉依賴的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（sodium rely on glucose transporters，SGLT），以主動(dòng)方式逆濃度梯度轉(zhuǎn)運(yùn)葡萄糖；另一類為易化擴(kuò)散的GLUT，以易化擴(kuò)散的方式順濃度梯度轉(zhuǎn)運(yùn)葡萄糖，其轉(zhuǎn)運(yùn)過程不消耗能量。易化擴(kuò)散的GLUT是由至少13種膜蛋白組成的一個(gè)蛋白質(zhì)家族。研究發(fā)現(xiàn)，成骨細(xì)胞樣UMR-106細(xì)胞系[12]和關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞[13]中表達(dá)GLUT-1、3，本研究證實(shí)大鼠成骨細(xì)胞也表達(dá)GLUT-1、3。

GLUT-1是已知分布最廣的轉(zhuǎn)運(yùn)體，其高效表達(dá)于人類紅細(xì)胞、腦、眼、周圍神經(jīng)及胎盤等組織中，維持基礎(chǔ)狀態(tài)下組織的葡萄糖攝入。GLUT-3和GLUT-1一樣在很多細(xì)胞中都有表達(dá)，但以腦組織中分布最多。GLUT-3也是具有高親和力的高效轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，Km值極低，對(duì)于不能儲(chǔ)存糖原卻又對(duì)葡萄糖有很高需要量的組織來說，GLUT-3便成為理想的葡萄糖運(yùn)載體[14]。

研究[15-16]發(fā)現(xiàn)高糖環(huán)境可以影響GLUT-1的表達(dá)，但結(jié)論不統(tǒng)一。據(jù)報(bào)道高糖可以促進(jìn)腎小球系膜細(xì)胞和視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞GLUT-1的表達(dá)，卻降低絨毛膜細(xì)胞和腎小管細(xì)胞GLUT-l的表達(dá)[3-4]。研究[17]發(fā)現(xiàn)，高糖環(huán)境提高了成骨細(xì)胞GLUT-1蛋白的表達(dá)。筆者的研究結(jié)果也證實(shí)高糖環(huán)境上調(diào)成骨細(xì)胞GLUT-1蛋白的表達(dá)。有研究[18]表明細(xì)胞外糖濃度升高導(dǎo)致滲透壓的改變，引起系膜細(xì)胞的GLUT-1表達(dá)的升高。因此，葡萄糖濃度的改變，導(dǎo)致滲透壓改變是成骨細(xì)胞GLUT-1表達(dá)升高的重要原因。筆者也發(fā)現(xiàn)在高糖環(huán)境中，成骨細(xì)胞GLUT-3的表達(dá)是輕微下調(diào)的，這與其他研究[18]結(jié)果一致，即高糖環(huán)境導(dǎo)致視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞GLUT-3的下降。GLUT-3是高效轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，它的轉(zhuǎn)運(yùn)效率是GLUT-1的3倍，本實(shí)驗(yàn)中總的糖攝取是下降的，原因可能是高糖環(huán)境下GLUT-3的輕微下調(diào)，就能影響成骨細(xì)胞糖攝取的改變。

胰島素能促進(jìn)UMR-106細(xì)胞和關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞GLUT-1、3的表達(dá)，也能促進(jìn)成骨樣細(xì)胞的糖攝取增加[12-13]。而格列美脲不僅能作用于胰島β細(xì)胞，也能作用于機(jī)體的其他細(xì)胞[8-10]，產(chǎn)生一系列的類胰島素信號(hào)樣作用[9-10]。它能夠上調(diào)大鼠的脂肪細(xì)胞和骨骼肌細(xì)胞GLUT-1、4的表達(dá)[9-10]。本研究結(jié)果證實(shí)格列美脲在2種糖濃度下提高了成骨細(xì)胞糖攝取，并且上調(diào)了GLUT-1、3的蛋白表達(dá)。結(jié)果提示格列美脲在成骨細(xì)胞也可[專業(yè)提供寫作論文和論文寫作服務(wù)，歡迎您的光臨dylw.net]能發(fā)揮類胰島素樣所用。格列美脲對(duì)成骨細(xì)胞GLUT-1、3蛋白的促進(jìn)作用受到了16.5 mmol·L-1葡萄糖濃度的抑制，這說明高糖環(huán)境降低了格列美脲促進(jìn)成骨細(xì)胞GLUT-1、3蛋白表達(dá)的敏感性。筆者前期研究已經(jīng)證實(shí)格列美脲能夠促進(jìn)大鼠下頜骨成骨細(xì)胞的增殖分化和礦化[19]，葡萄糖作為維持細(xì)胞能量代謝和生命活動(dòng)的重要原料，推測(cè)格列美脲對(duì)糖攝取的影響可能發(fā)揮了相關(guān)的作用，其相關(guān)性還待進(jìn)一步研究。

[參考文獻(xiàn)]

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like cell[J]. Endocrinology， 1989， 124（2）：701-706.

篇（8）

[論文] 人類胎盤不僅在胎兒—胎盤—母體的關(guān)系上起中心軸的作用，而且功能上失調(diào)會(huì)導(dǎo)致母體和胎兒的病理性變化，隨著妊娠的進(jìn)展，絨毛和滋養(yǎng)層不斷成熟和分化，已發(fā)現(xiàn)許多物質(zhì)包括原癌基因產(chǎn)物，在胎盤有生理性的表達(dá)。胎兒的發(fā)展特征是細(xì)胞群增殖和誘導(dǎo)或抑制細(xì)胞凋亡成熟起來的，因此，胎盤在妊娠期間也經(jīng)歷著相似的變化。我們通過測(cè)定胎盤組織中細(xì)胞凋亡調(diào)控基因bcl-2、bax及細(xì)胞增殖基因ki67，進(jìn)一步探討了妊娠高血壓綜合征（PIH）的病理性變化。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 隨機(jī)選擇1998年11月至1999年4月白求恩醫(yī)科大學(xué)第二臨床醫(yī)院及長(zhǎng)春市婦產(chǎn)醫(yī)院婦科門診及產(chǎn)科病房的孕產(chǎn)婦66例。（1）妊高征組36例，平均26.14±3.42歲，平均孕37.44±3.9周，輕度9例，中度10例，重度17例；(2)正常妊娠組30例，孕早期10例，平均25.25±3.80歲，平均孕9.03±1.11周；孕中期5例，平均26.55±3.93歲，平均孕24.05±3.63周；孕晚期（對(duì)照組）15例，平均27.76±3.38歲，平均孕39.82±1.32周。

1.2 標(biāo)本采集及處理 孕早期是行人工流產(chǎn)術(shù)者，孕中期是來自無妊娠合并癥、并發(fā)癥，要求終止妊娠而行水囊引產(chǎn)者，孕晚期為單胎足月初產(chǎn)婦，無妊娠合并癥、并發(fā)癥、以自然分娩及擇期剖宮產(chǎn)手主結(jié)束分娩，其剖宮產(chǎn)指標(biāo)主要是頭盆不稱及社會(huì)因素。妊高征組孕婦是無慢性高血壓、慢性腎炎及其它心腎疾病的病史者。

早孕絨毛組織不需進(jìn)一步處理，取出后用生理鹽水沖洗凈，即用10%福爾馬林液固定。中、晚期胎盤組織于分娩后立即在母體面（避開鈣化、機(jī)化灶）隨機(jī)取3個(gè)不同區(qū)域約2cm×2cm×2cm胎盤組織，生理鹽水沖洗干凈后立即放入10%福爾馬林固定液中。

1.3 方法 用免疫組化SP法，抗bcl-2、抗bax、抗ki67單克隆抗體即用型及SP試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物工程公司。每次染色均設(shè)陽(yáng)性和陰性對(duì)照。

1.4 結(jié)果判定 由2名醫(yī)師獨(dú)立觀察切片中10個(gè)高倍視野。（1）陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：SP法顯示bcl-2及bax定位于胞漿和胞膜內(nèi)，反應(yīng)產(chǎn)物為棕黃色。根據(jù)顯色程度分為4級(jí)：（-）為無著色，（+）為淡黃色，（++）為棕黃色，（+++）為棕褐色;（2）SP法顯示ki67以細(xì)胞核呈清晰棕褐色為陽(yáng)性，按陽(yáng)性細(xì)胞占C-cells的比例分為：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜10%為（-）；10%-20%為（+）；20%-30%為（++）；＞30%為（+++）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析Fisher精確概率檢驗(yàn)法，兩組計(jì)數(shù)資料用等級(jí)相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2. 1 正常妊娠期胎盤組織中bcl-2、bax及ki67的基因表達(dá)bcl-2表達(dá)主要定位在絨毛的S-cells，而bax在S-cells和C-cells均呈陽(yáng)性，同時(shí)在絨毛間質(zhì)中bax也呈陽(yáng)性表達(dá)，但強(qiáng)度低于滋養(yǎng)層細(xì)胞；ki67蛋白主要定位在C-cells。bcl-2在晚期妊娠組的陽(yáng)性率明顯低于早、中期妊娠組（P＞0.05）；ki67在晚期妊娠組的陽(yáng)性率明顯低于早、中期妊娠組（P＜0.01）。早、中、晚期妊娠組bcl-2的表達(dá)強(qiáng)度與ki67的表達(dá)強(qiáng)度無相關(guān)性（P＞0.05），bax與ki67也無相關(guān)性（P＞0.05）。

2 .2 妊高征與正常晚期妊娠胎盤組織中bcl-2、bax及ki67的基因表達(dá)bcl-2的陽(yáng)性率在對(duì)照組與PIH兩組間差異無顯著性（P＞0.05），bax兩組差異無顯著性（P＞0.05），對(duì)照組ki67的陽(yáng)性率明顯低于PIH組（P＜0.01）。bcl-2與ki67的表達(dá)強(qiáng)度無相關(guān)性（P＞0.05），bax與ki67也無相關(guān)性（P＞0.05）。

2.3 妊高征胎盤組織中bcl-2、bax及ki67的基因表達(dá)bcl-2的陽(yáng)性率在輕、中、重度PIH3組間差異無顯著性（P＞0.05），bax在3組間差異也無顯著性（P＞0.05），而ki67在輕度PIH組的陽(yáng)性率明顯低于中、重度組（P＜0.01）。PIH輕、中、重度組妊娠bcl-2的表達(dá)強(qiáng)度與ki67的表達(dá)強(qiáng)度經(jīng)等級(jí)相關(guān)分析無相關(guān)性（P＞0.05），bax與ki67也無相關(guān)性（P＞0.05）。

3 討論

3.1 正常妊娠與妊高征胎盤組織bcl－2、bax的基因表達(dá)bcl－2是細(xì)胞凋亡的重要抑制基因。本研究中免疫組化已確定bcl－2定位在S－cell表達(dá)，并且從正常早孕到晚期妊娠持續(xù)出現(xiàn)[3，6]，因此保留滋養(yǎng)層細(xì)胞團(tuán)可能是維持妊娠的一種機(jī)制[1]。晚期妊娠bcl－ 2表達(dá)下降、可能是因?yàn)閎cl－2正常生理性功能，在孕晚期組成胎盤的細(xì)胞不再需要存活，可能是細(xì)胞凋亡的一種早期生物學(xué)變化，也可能與分娩有關(guān)[2]。

目前已知bcl－2和bax是bcl－2家族中重要成員。bcl－2表達(dá)水平較高時(shí)，可形成bcl－2和bax的異源二聚體，細(xì)胞凋亡受到抑制； bax表達(dá)水平較高時(shí)，可形成bax－bax同源二聚體，加速細(xì)胞凋亡。本研究中，對(duì)照組bcl－2與bax的陽(yáng)性率為66．7％與80％，PIH組的陽(yáng)性表達(dá)均為75％，表明大多數(shù)胎盤組織均呈bcl－2與bax高表達(dá)。bcl－2和bax表達(dá)已在一定水平上達(dá)到平衡，所以在胎盤組織中不起介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的主導(dǎo)作用。

篇（9）

端粒酶抑制劑對(duì)于惡性癌癥的臨床作用，通過近幾年來的研究，正逐漸為人所熟悉。其作用機(jī)制各有不同，但最終的效用都能夠抑制惡性腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)與分裂［1］。此類物質(zhì)包括：反義寡核苷酸,逆轉(zhuǎn)錄抑制劑，G-四連體穩(wěn)定劑，蛋白激酶C抑制劑，化療藥物。

1 反義寡核苷酸(antisense oligodexoynuclectide, ASODN)

反義寡核苷酸能夠與靶RNA或DNA特異性互補(bǔ)，能夠使得惡性腫瘤細(xì)胞端粒酶活性降低，進(jìn)而其增殖能力下降，甚至調(diào)亡。應(yīng)用這一原理，人工的合成針對(duì)模板序列的反義核苷酸抑制劑在研究中已取得很大突破。

例如Mete等［2］使用硫代反義核苷酸(PAS-ODN)對(duì)Burkitts瘤中淋巴瘤細(xì)胞系OMA-BLI生長(zhǎng)有明顯的壓制作用，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。此外夏雪梅等［3］對(duì)凋亡抑制基因survivin反義寡核苷酸的研究表面，通過使用bcl-2反義寡核苷酸對(duì)肺癌細(xì)胞株的抑制作用十分顯著，可出現(xiàn)肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制以至凋亡，細(xì)胞survivin mRNA明顯下降。肺癌細(xì)胞株survivin基因表達(dá)受到survivin反義寡核苷酸的有效抑制。并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和生長(zhǎng)延緩，同時(shí)也證明聯(lián)合bcl-2反義寡核苷酸對(duì)提升抗癌能力有明顯功用。

2 逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(reserve transcripitase inhabitors)

3-疊氮-3-脫氧胸腺核苷(3-azido-2,3-dideoxythymidine, AZT)作為逆轉(zhuǎn)錄抑制劑中最為人所關(guān)注的一種，其臨床價(jià)值得到廣泛肯定。

呂繼博［4］用改良的MTT法測(cè)定不同濃度AZT處理C6膠質(zhì)瘤干細(xì)胞及膠質(zhì)瘤細(xì)胞后,在不同階段的藥物敏感性。MTT結(jié)果顯示，ATZ對(duì)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞及膠質(zhì)瘤細(xì)胞有著異常強(qiáng)烈的抑制作用，且隨著AZT的濃度增加及作用時(shí)間的延長(zhǎng)，其抑制細(xì)胞的增殖作用逐漸增強(qiáng),有時(shí)間-劑量相關(guān)關(guān)系。通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)可得：伴隨AZT濃度的增加，膠質(zhì)瘤干細(xì)胞及膠質(zhì)瘤細(xì)胞的S期細(xì)胞比例增高，并伴有凋亡細(xì)胞的增多。進(jìn)一步表明AZT作用于S期細(xì)胞，抑制C6膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的生長(zhǎng)，但C6膠質(zhì)瘤干細(xì)胞對(duì)AZT存在耐藥性，需注意。

3 G-四聯(lián)體穩(wěn)定因子

G-四聯(lián)體穩(wěn)定因子的作用機(jī)制在于特異性的結(jié)合于端粒3端由鳥嘌呤折疊形成的四鏈DNA，既是G-四連體上，從而阻止端粒和端粒酶的結(jié)合，抑制其活性。

目前，三乙烯四胺(TETA)的研究有較大進(jìn)展。殷菲等［5］通過實(shí)驗(yàn)證明三乙烯四胺(Triethylene tetramine,TETA)能夠與G4-DNA產(chǎn)生相互作用提高其穩(wěn)定性。TETA能夠促進(jìn)G4-DNA這一有分子間平行特性的分子的形成,繼而抑制端粒酶陽(yáng)性的HeLa、MCF-7、K562、ECV•304及PC12細(xì)胞的增殖。作用72 h，TETA對(duì)各種細(xì)胞的半數(shù) 抑制濃度(IC5o值)分別為：HeLa細(xì)胞75株，MCF-7細(xì)胞124株,K562 細(xì)胞175株,EeV-304細(xì)胞221株，PelZ細(xì)胞452株；而對(duì)人體內(nèi)端粒酶陰性的HLF細(xì)胞的增殖則無明顯效用。上述研究結(jié)果表明TETA的作用機(jī)制為：穩(wěn)定G4-DNA的結(jié)構(gòu)的同時(shí)抑制端粒酶活性，以達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用。

4 蛋白激酶C抑制劑

蛋白激酶C作為激活細(xì)胞活性的重要環(huán)節(jié)，在信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)中的作用不言而喻。Ku-WC等［6］發(fā)現(xiàn)蛋白抑制劑和H-7對(duì)鼻炎癌細(xì)胞NPC-076端粒酶活性，有很強(qiáng)的抑制作用。

此外，張海泉等［7］發(fā)現(xiàn)，通過對(duì)星型孢菌素進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造可以得到一系列吲哚馬來酰亞胺類化合物，既是一類新型蛋白激酶C抑制劑。采用MTT法對(duì)的抗腫瘤活性進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)吲哚馬來酰亞胺類化合物在10 μm濃度下，對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞株均表現(xiàn)出不同程度的抑制作用。而對(duì)其他腫瘤細(xì)胞株，諸如白血病K562等的抑制作用以及其進(jìn)一步的抗腫瘤活性和作用機(jī)理目前尚未徹底闡明。

5 化療藥物

化療作為癌癥治療的常規(guī)手段，對(duì)于癌癥的治愈有重要作用。順鉑作為一種常用的化療藥物，在臨床中廣泛使用。何春容等［8］發(fā)現(xiàn)順鉑對(duì)表達(dá)鋅指蛋白217(ZNF217)的卵巢癌組織的化療敏感性呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。既是卵巢癌耐藥株ZNF217為高表達(dá)，而卵巢癌敏感株則為低表達(dá)；ZNF217在卵巢癌耐藥株中為核表達(dá)，但在卵巢癌敏感株則主要為漿表達(dá)；此外順鉑可以下調(diào)凋亡終末效應(yīng)酶caspase 3和caspase 9活性，并作用于端粒酶，最終促進(jìn)卵巢癌組織細(xì)胞的凋亡(鋅指蛋白217可以抑制這一過程)。

綜上所述，以反義核苷酸抑制劑為代表的端粒酶抑制劑，能通過各自不同的作用機(jī)制抑制端粒酶的活性，從而最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的凋亡。這對(duì)于癌癥的治療有著顯著的臨床意義，但例如AZT所存在的耐藥性，以及順鉑對(duì)于ZNF217的依賴，都影響了它們的作用效果。其工作機(jī)制還需進(jìn)一步闡明。

參 考 文 獻(xiàn)

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［3］ 夏雪梅，陳余清，蔡應(yīng)云,等. 調(diào)亡抑制基因SURBIBIN反義寡核苷酸聯(lián)合Bcl-2反義核苷酸誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞株凋亡的實(shí)驗(yàn)觀察.中國(guó)臨床康復(fù),2005,47:140-149.

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［5］ 殷菲，碰孝軍. 三乙烯四胺與G四鏈體DNA相互作用、抑制端粒酶活性及抗腫瘤作用研究.大連：大連理工大學(xué)，2005.

篇（10）

抗重組人腫瘤壞死因子—α單克隆抗體的研制及其初步應(yīng)用劉雪松金伯泉(8)

分泌抗rHuIL—6McAb雜交瘤細(xì)胞系的建立及其應(yīng)用研究楊琨任啟生(12)

載脂蛋白B單克隆抗體透射免疫比濁測(cè)定法的探討趙滿倉(cāng)段雪梅(17)

抗淋球菌PIA單克隆抗體的制備和應(yīng)用分析陳偉余模松(21)

鼠抗丙型肝炎病毒ns—5區(qū)單克隆抗體的研究劉瑩李秀華(24)

用堿性磷酸酶免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)檢測(cè)小鼠血清中的HFRS病毒抗體許輝金伯泉(27)

檢測(cè)HFRS患者血清IgM抗體的快速ELISA捕捉法的建立及其與常規(guī)法…王海濤徐志凱(32)

抗人小細(xì)胞型肺癌和抗CD3單克隆抗體的異質(zhì)交聯(lián)體的制備及其…韓立軍王德斌(35)

抗人胎盤酸性鐵蛋白McAb的制備及其鑒定朱慧芬游上游(39)

抗HFRSV鼠／人嵌合抗體基因的構(gòu)建祝道成李以莞(42)

單克隆抗體組建黃曲霉毒素酶免疫檢測(cè)試劑盒的研究季永鏞陸建華(46)

抗TG單克隆抗體的制備及初步鑒定徐榮佳陳曉英(48)

抗人IL—3McAb雜交瘤細(xì)胞系的制備與鑒定黃傳書陳常慶(50)

適時(shí)應(yīng)用飼養(yǎng)細(xì)胞提高雜交瘤細(xì)胞克隆形成率的探索王建六李文錦(51)

兩種簡(jiǎn)易高效的單克隆抗體提純方法曹軍平閆桂玲(52)

用體外免疫的人淋巴細(xì)胞研制抗HBsAg單克隆抗體孫佩芳橋爪秀一(54)

用BALB／c與ICR雜交子一代小鼠及新產(chǎn)仔母鼠生產(chǎn)單克隆抗體的觀察渠川玫田克恭(58)

CEA單克隆抗體在腫瘤診斷和治療中的應(yīng)用及進(jìn)展寧楊(62)

胃癌單克隆抗體的研究和應(yīng)用呂同德(65)

腫瘤多藥耐藥分子單克隆抗體的研究現(xiàn)狀李明峰(69)

T－B細(xì)胞協(xié)作研究的重大突破——濾泡輔T細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)，一個(gè)新的CD^4＋效應(yīng)T細(xì)胞亞群金伯泉(1)

人大腸癌抗原基因cDNA噬菌體表達(dá)文庫(kù)的構(gòu)建和鑒定單克隆抗體通訊 陳航方瑾(6)

重組疫苗E.coliLLO／OVA經(jīng)TLR4和NOD1受體誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞因子徐曼戴明桑米粲(9)

體內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)HER2多表位基因B16細(xì)胞系的建立李賀向澤敏吳秀麗王莉衛(wèi)紅飛萬敏王麗穎(13)

酪氨酸激酶抑制劑A771726阻斷IL-13對(duì)成纖維細(xì)胞的促膠原合成作用熊麗霞李文林石小玉劉卓琦唐洪林(16)

EB病毒轉(zhuǎn)化B淋巴母細(xì)胞在漢灘病毒CTL表位研究中的應(yīng)用王美亮張全華王九平李永明馬櫻金伯泉(20)

Rapamycin和cyclosporinA對(duì)同種排斥過程中TLR5及Foxp3表達(dá)的影響陳富強(qiáng)曲莉莉張超梁婷宋靜徐佳侯桂華(23)

IL－11保護(hù)中子照射后腸上皮損傷的Jak／STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制研究王瑞娟彭瑞云高亞兵常公民徐新萍付凱飛羅慶良(27)

pSG5／NS5A5BC質(zhì)粒的構(gòu)建及在Huh7細(xì)胞中的表達(dá)王雪萍李富軍鄧琳長(zhǎng)野（藤井）基子北山喜久美堀田博(31)

大鼠CD36基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá)王欣陳瑩陳杰(35)

關(guān)于《醫(yī)學(xué)索引》／MEDLINE(8)

關(guān)于中國(guó)精品科技期刊(19)

關(guān)于“總被引頻次”和“影響因子”(22)

2007年MEDLINE收錄論文數(shù)較多的高校(30)

2007年MEDLINE收錄論文數(shù)較多的研究機(jī)構(gòu)(34)

2007年MEDLINE收錄論文數(shù)較多的醫(yī)院(37)

2007年國(guó)內(nèi)論文數(shù)較多的高校(41)

2007年國(guó)內(nèi)論文數(shù)較多的醫(yī)院(81)

科技動(dòng)態(tài)：一群分泌IL-9-IL-10新的CD4^＋T細(xì)胞群馬櫻金伯泉(86)

紫杉醇和順鉑誘導(dǎo)下的凋亡卵巢癌細(xì)胞對(duì)樹突細(xì)胞提呈功能影響馮勤梅吳霞王穎葛海良狄文(38)

免疫干預(yù)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無力小鼠的B細(xì)胞活化機(jī)制王蓉楊歡肖波張麗芳(42)

TWEAK誘導(dǎo)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞合成MMP-3的實(shí)驗(yàn)研究夏麗萍肖衛(wèi)國(guó)李俊松丁爽魯靜(46)

順鉑聯(lián)合exosomes抗小鼠肝癌效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究汪少華沈宜李靜向自武范維珂陳黎(49)

Alzheimer患者血清中抗Aβ42自身抗體的純化及鑒定段金海徐書雯莫建偉向紹通方運(yùn)勇汪華僑莫思杰(53)

鎖陽(yáng)提取物對(duì)衰老模型鼠免疫功能及自由基代謝的影響劉永琦蘇韞吳建軍張毅魏舒暢聶蕾顏春魯(55)

抗體工程鈣整合素結(jié)合蛋白CIB的原核表達(dá)及多克隆抗體的制備與亞細(xì)胞定位石潔惠玲張煦王曉輝楊金升呂同德趙治華(58)

抗人骨橋蛋白單克隆抗體的制備及鑒定周群芳鞠吉雨郎景和(62)

人源性抗血小板膜糖蛋白IIb／IIIaFab抗體的研制及其對(duì)血小板聚集功能的影響董寧征崔宇杰阮長(zhǎng)耿(65)

兔抗凋亡蛋白酶活化因子－1多克隆抗體的制備、純化與鑒定張文劉胡志軍高琰高志濤王輝(68)

糖皮質(zhì)激素對(duì)哮喘豚鼠模型Eotaxin、CCR3表達(dá)的調(diào)控呂麗麗朱述陽(yáng)劉平莉(70)

甲狀旁腺素對(duì)人腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化和TGF-β1表達(dá)的影響李曉東丁新國(guó)李英(73)

黃芩苷對(duì)小鼠T淋巴細(xì)胞體外增殖和細(xì)胞周期的影響李林曾耀英黃秀艷宋兵楊志滕菲姚滿林(75)

VCC－1真核表達(dá)載體的構(gòu)建及肝癌細(xì)胞SMMC7721穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株的建立及鑒定牟霞陳瑤王穗海黃湘李明(79)

CD1d四聚體檢測(cè)NKT細(xì)胞劉景華竇立萍王莉莉于力(82)

iNKT細(xì)胞多樣性調(diào)節(jié)機(jī)制及其在疾病中的作用陳鈺(84)

人類自然殺傷細(xì)胞發(fā)育研究進(jìn)展于建渤劉衛(wèi)平(87)

內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)黏附分子的研究進(jìn)展張宇桑晨莊逢源(89)

抑制性受體LAIR家族的研究新進(jìn)展馬櫻陳麗華金伯泉(92)

細(xì)粒棘球絳蟲重組Bb-Eg95-EgA31疫苗誘導(dǎo)小鼠免疫應(yīng)答的動(dòng)態(tài)觀察周必英陳雅棠李文桂楊梅(99)

四種靶向因子與柯薩奇病毒B3VP1融合基因疫苗免疫效果的比較劉貴霞藍(lán)佳明揣俠高志云金玉懷張永紅謝立新(103)

單克隆抗體通訊 SA/mIL15雙功能融合蛋白的制備及其生物學(xué)鑒定陳艷麗許曉玲唐佳聶小霞宋志純胡志明高基民(107)

NF-κB抑制劑和IFN-γ對(duì)BAFF-R基因啟動(dòng)子活性的影響袁宏香王躍國(guó)吳信華倪紅兵浦江申嫻娟鞠少卿(111)

完全與不完全睡眠剝奪對(duì)小鼠免疫功能的影響楊天陽(yáng)黃燕華蔡昊曼余奇文(115)

ConA對(duì)CD4＋CD25＋調(diào)節(jié)性T細(xì)胞早期活化和功能的影響胡義平李曉娟劉叔文(118)

人泡沫病毒介導(dǎo)IL-24對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用陳思翀姚辰陳芳劉萬紅陶衛(wèi)萍李文鑫(121)

小鼠STAT4和STAT6基因酵母雙雜交表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定張明香符州田代印王莉佳劉恩梅羅征秀戴繼宏(125)

MPP＋對(duì)原代培養(yǎng)SAMP8小鼠中腦神經(jīng)元的毒性作用劉靜柳建強(qiáng)劉力馬琳王彥永馬芹穎王銘維(129)

結(jié)締組織生長(zhǎng)因子在幼年兔關(guān)節(jié)軟骨全層缺損修復(fù)中的表達(dá)及意義付建軍初同偉周躍劉玉剛(132)

骨髓源性干細(xì)胞向慢性馬兜鈴酸腎病大鼠腎小管上皮細(xì)胞分化的研究李維敖然姜紅馮江敏(135)

UO-126對(duì)HeLa細(xì)胞增殖及對(duì)FBW7表達(dá)的影響孫迪沈宜汪少華向自武謝瑩珊姜歆(138)

ASPH在腫瘤細(xì)胞和腫瘤組織中的分布及檢測(cè)宋凱薛小平王偉呼延霆汪樺楊慧謝瓊(141)

人源化抗炭疽芽胞桿菌保護(hù)性抗原單鏈抗體的設(shè)計(jì)和表達(dá)李冰張軍徐俊杰劉樹玲付玲李建民陳薇(145)

PCB77人工抗原的合成及多克隆抗體的制備杜瑞雪范仲學(xué)郭篤發(fā)李廣存蔡利娟(149)

放療分割劑量對(duì)食管癌細(xì)胞耐藥基因表達(dá)的影響張廣健高蕊張明鑫金鑫梁鵬王健生(152)

PCNA和Caspase-3在肺癌組織中的表達(dá)及意義趙陽(yáng)李曉軍隋昕湯小江秦宏任宏(154)

細(xì)胞角蛋白7和19在結(jié)腸癌中的表達(dá)及意義張欣鄭鵬生(157)

多發(fā)性骨髓瘤患者外周血CD3ε基因的表達(dá)特點(diǎn)林春蘭陳少華楊力建周羽竝陳思HttP://李揚(yáng)秋(159)

伊馬替尼對(duì)慢性粒細(xì)胞白血病患者T細(xì)胞免疫功能的影響李振宇徐開林(162)

葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4活性與鈣超載后心肌細(xì)胞胰島素抵抗陳煥文李勇剛石應(yīng)康(164)

強(qiáng)化阿托伐他汀對(duì)老年冠狀動(dòng)脈介入后血清MCP-1、hs-CRP和sFas因子的影響問海燕陳宏斌(167)

電刺激對(duì)腦梗死大鼠運(yùn)動(dòng)功能及骨形成蛋白表達(dá)的影響趙麗妹李曉紅王棟(169)

體外不同動(dòng)態(tài)力學(xué)應(yīng)變對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞整合素α5、α6及β1的表達(dá)影響侯睿陳新民巢永烈李小玉(172)

Toll樣受體4和巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞生物活性的影響王照娟陳龍華梁婷宋靜張超侯桂華(175)

人FcγRⅠ受體胞外區(qū)基因的克隆、原核表達(dá)及純化苗現(xiàn)偉劉璽張改平席俊張利娜劉運(yùn)超游雷鳴(178)

人CD4＋T淋巴細(xì)胞活化相關(guān)miRNA的篩選及其靶分子鑒定薛茜郭張燕李偉王濤孟艷玲楊安鋼(181)

唾液支原體分別經(jīng)NF-κB依賴性和非依賴性方式誘導(dǎo)HGEC產(chǎn)生IL-1β、IL-8和表達(dá)hBD-2王玉愛劉志杰(184)

腦組織切片免疫組化技術(shù)中防止脫片制作方法夏明汗潘曉婷(187)

海洛因依賴者外周血T細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞檢測(cè)分析劉徽婷王嘉軍周永芹張偉(188)

ABO血型鑒定不相符的影響因素及其預(yù)防方法張勇萍楊世明田榆曹麗妍(190)

HIV-1Tat疫苗基礎(chǔ)研究進(jìn)展龐強(qiáng)廖文婷潘衛(wèi)(192)

腫瘤疫苗的研究進(jìn)展羅軍強(qiáng)臧林泉(195)

B淋巴細(xì)胞與免疫老化陳昌友朱華亭邱玉華(198)

間充質(zhì)干細(xì)胞作為免疫調(diào)節(jié)劑用于臨床肝移植治療研究進(jìn)展王嗣予王福生(200)

幽門螺桿菌alpA基因在乳酸菌中的表達(dá)及免疫原性分析孫振璐畢研偉白彩明高丹丹李智華戴宗祥李健峰(203)

人PD-1Δex3基因的克隆、表達(dá)及其生物學(xué)活性的鑒定胡振華陳永井王勤施畢旻白利雄張學(xué)光(207)

天麻素對(duì)乙醇誘導(dǎo)肝細(xì)胞株L02細(xì)胞損傷的影響柏志全胡巢鳳孫麗萍(211)

酪氨酸磷酸化抑制劑AG490抑制JurkatT細(xì)胞增殖毛成全邢飛躍郭中峰方志遠(yuǎn)(214)

Survivin在小鼠髓源性樹突狀細(xì)胞不同分化階段中的差異性表達(dá)余昆茍欣楊華安周青松仲偉營(yíng)鄭軍(217)

葡萄球菌分離株腸毒素sek基因的分布及其蛋白的表達(dá)純化黃金海劉業(yè)兵劉瑩孫躍輝李琳張麗霞(220)

人EPO基因重組腺病毒載體的構(gòu)建及表達(dá)單克隆抗體通訊 陳邦黨馬依彤馬翔楊毅寧劉芬(223)

葛根素對(duì)脂多糖誘導(dǎo)N9小膠質(zhì)細(xì)胞激活的抑制作用白群華李文明劉洪濤陳文娟于超(227)

DO11.10轉(zhuǎn)基因小鼠脊髓損傷后的運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)王慧郭俊趙宇卞干蘭劉芳芳于才勇馮睿(231)

抑制核因子κB與妊娠糖尿病大鼠子宮胰島素抵抗的關(guān)系魏波塔娜李佳張建芳陳必良(235)

哮喘大鼠淋巴液與血液CD4^＋CD25^＋Treg及IL-10、TGF-β水平比較和地塞米松干預(yù)的影響趙志旭馮學(xué)斌石濤楊成張立霞(238)

人UNC5CL原白的表達(dá)及多克隆抗體的制備和鑒定呂丹錢曉萍田曉軍張毓張君(242)

翻譯控制腫瘤蛋白TPT1的原核表達(dá)、純化、抗體制備和初步應(yīng)用趙一璠李海芳湯石明王萌吳海東劉民李欣(246)

人源抗梭曼過渡態(tài)類似物（P6）的抗體篩選王欲曉賈培媛王玉霞喬媛媛楊日芳周麗君(250)

人Fkbp19的多克隆抗體的制備范開吉張彥劉迺發(fā)孫強(qiáng)楊曉(253)

抗GBM抗體特異性單鏈抗體scFv3原核表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá)王雅楠?jiǎng)⒄骆i邢國(guó)蘭趙國(guó)強(qiáng)肖靜王沛(255)

人脫嘌呤脫嘧啶核酸內(nèi)切酶單克隆抗體抗原表位的鑒定及應(yīng)用單錦露戴楠張沁宏李增鵬曹曉靜王東(258)

尼美舒利提高γδT細(xì)胞殺傷胃癌細(xì)胞的機(jī)制探討劉軍權(quán)陳復(fù)興鞏新建李慧忠蔡凱張寶福張頌(261)

URG4在肝癌組織中的表達(dá)及其與HBx的關(guān)系王燕李增山劉杰謝華紅(264)

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者外周血Th17/Treg細(xì)胞比率失衡的研究牛倩黃卓春蔡蓓王蘭蘭馮偉華(267)

IL-17A與自身免疫性疾病發(fā)病機(jī)制的初步探討陳小奇徐焱成鄧浩華孫家忠代喆(270)

系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清中β抑制蛋白質(zhì)-1水平及其與疾病活動(dòng)性的關(guān)系王敬亞王曉非蔣力張曉莉張晶陳涓涓孫小鳳(273)

海洛因依賴者急性戒斷前后IL-1β、TNF-α、ACTH及CORT含量變化的研究劉徽婷王嘉軍(274)

鼻腔及鼻竇內(nèi)翻性狀瘤預(yù)后與臨床病理免疫組織化學(xué)參數(shù)的相關(guān)性李延輝(276)

D2蛋白酶雙抗體夾心ELISA定量檢測(cè)方法的建立蘇潔王斌魯曉晴趙巍閆志勇錢冬萌丁守怡(278)

卵清蛋白霧化吸入誘導(dǎo)腸道菌群失調(diào)小鼠肺部過敏反應(yīng)的發(fā)生孫大慶楊錫強(qiáng)劉瑋李欣(281)

Hlx修飾的樹突狀細(xì)胞系（DC2.4/mHlx）的建立何志強(qiáng)王勝軍薛淵石燕柳迎照仝佳陳建國(guó)(285)

鋰-匹魯卡品誘導(dǎo)大鼠癲癇發(fā)作后海馬齒狀回IL-1mRNA表達(dá)的變化張世俊李曉偉王瑩魏東江文(288)

介導(dǎo)穿孔素短發(fā)夾RNA重組腺病毒的構(gòu)建及其生物學(xué)作用趙莉琳劉陽(yáng)(291)

頸動(dòng)脈狹窄影響大鼠認(rèn)知功能及海馬神經(jīng)元凋亡張強(qiáng)寇宏蘭晶池英張其梅李耀彩(294)